Аст 1000

Аст 1000

АсАТ-ВИТАЛ-01/11 (АСТ В 02.01, В 02.11)

ЦЕНА

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ  УНИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ РАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ

 

 

Кат. № В 02.01 — 400 определений (при объеме пробы 3,05 мл)

Кат. № В 02.11 — 1000 определений (при объеме пробы 3,05 мл)

 

ПРИНЦИП МЕТОДА

 

1.L-аспартат + a-кетоглутарат  ¬¾АсАТ ¾®

оксалоацетат + L-глутамат

2. фотометрическое определение содержания оксалоацетата в пробе на основе реакции с 2,4-динитрофенилгидразином

 

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ (ОБРАЗЕЦ)

 

Свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза

 

СОСТАВ НАБОРА

 

РЕАГЕНТ № 1 — СУБСТРАТНАЯ СМЕСЬ

L-аспарагиновая кислота…………………..………0,1 моль/л

a-кетоглутаровая кислота……………………..2,0 ммоль/л

фосфатный буфер, рН 7,4.……………………..0,1 моль/л

 

РЕАГЕНТ № 2 — РАСТВОР 2,4-ДНФГ

………….………………………….…………1,0 ммоль/л

 

РЕАГЕНТ № 3 — КАЛИБРАТОР

раствор пирувата натрия……………………1,0 ммоль/л

 

РЕАГЕНТ № 4 — НАТРИЙ ЕДКИЙ

NaOH.…………………………………………..4,0 моль/л

 

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

 

Линейность — отклонение не более 10 %

в диапазоне активностей 0,067-1,25 мкмоль/(с´л)

Чувствительность — не более 0,05 мкмоль/(с´л)

Коэффициент вариации – не более 10 %

Время проведения анализа – 90 мин

 

ХРАНЕНИЕ

 

  1. Срок годности набора – 12 мес ( хранение при 18-25°С).
  1. Срок хранения вскрытых реагентов №№ 1 и 3 –12 мес ( хранение при 2-4°С).
  1. Срок хранения вскрытых реагентов №№ 2 и 4 –12 мес ( хранение при 18-25°С).

 

ВНИМАНИЕ! Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования  реагентов.

 

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РЕАГЕНТА

 

Содержимое флакона № 4 (или аликвоту) развести бидистиллированной водой, свободной от карбонатов, в 10 раз (например, 1 мл реагента № 4 + 9 мл бидистиллированной воды).

Концентрация полученного рабочего реагента – 0,4 моль/л.

Срок хранения – 3 мес в плотно закрытой полиэтиленовой таре при 18-25°С.

 

ПРИМЕЧАНИЯ

  1. При активности АсАТ, превышающий 1,5 ммоль/(ч´л) [0,417 мкмоль/(с´л)], сыворотку крови следует развести. При расчете активности учесть степень разведения.
  2. 1U/л=16,67 нмоль/(с´л)=

0,0167 мкмоль/с´л=0,06 ммоль/ч´л

 

 

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

 

Длина волны: 500-560 нм (lopt=537нм).

Длина оптического пути: 1 см.

Температура инкубации : 37°С/18-25°С

 

Внести в пробирки:

 

Опытная проба

Холостая проба

Реагент № 1

0,25 мл

0,25 мл

Образец

0,05 мл

 

Пробы перемешать и инкубировать в водяной бане 60 мин при 37 °С.

Добавить в пробирки:

 

Опытная проба

Холостая проба

Реагент № 2

0,25 мл

0,25 мл

Образец

0,05 мл

 

Пробы перемешать и инкубировать 20 мин при 18-25°С.

Далее внести в пробирки по 2,5 мл рабочего реагента,  перемешать.

Фотометрировать через 5-10 мин против холостой пробы.

Стабильность окраски – не менее 30 мин.

Расчет активности фермента в сыворотке и плазме крови производят по калибровочному графику.

ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА

 

1

2

3

4.1

4.2

Проба 1

0,05

0,55

0,50

0,139

0,5

Проба 2

0,10

0,50

0,50

0,278

1,0

Проба 3

0,15

0,45

0,50

0,417

1,5

Проба 4

0,20

0,40

0,50

0,556

2,0

Проба 5

0,25

0,35

0,50

0,695

2,5

Проба 6

0,30

0,30

0,50

0,834

3,0

Холостая

 

Проба

0,60

0,50

 

  1. Реагент №  3 (калибратор), мл
  2. Бидистиллированная вода, мл
  3. Реагент № 2 (раствор 2,4-ДНФГ), мл

4.1.  Концентрация каталитической активнности АсАТ (С)

в калибровочной пробе, мкмоль/(с´л)

4.2. Концентрация каталитической активности АсАТ (С)

в калибровочной пробе,  ммоль/(ч´л)

 

Внести в пробирки компоненты 1-3, перемешать, инкубировать 20 мин при 18-25°С. Добавить во все пробир-ки по 5,0 мл рабочего реагента, перемешать и фотометри-ровать через 5-10 мин против контроля.

 

РАСЧЕТЫ

 

  1. По калибровочному графику рассчитать коэффициент k=C/А,

где: А – адсорбция калибровочной пробы;

С – концентрация каталитической активности  АсАТ в этой пробе.

2.  Каталитическая концентрация АсАТ (активность) в опытной пробе рассчитывается в мкмоль/(с´л) или ммоль/(ч´л) по формуле: (Аоп – Ахол )´ k,

где:  k – коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику,

Аоп — адсорбция опытной пробы,

Ахол — адсорбция холостой пробы.

 

НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ

 

0,028 – 0,190 мкмоль/(с´л) или 0,1 – 0,68 ммоль/(ч´л) при 37°С

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

 

Правильность проверена при помощи контрольных сывороток “Sigma enzyme control 2N” & “Sigma enzyme control 2E” (Sigma chemical company, USA).

 

ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА НЕОБХОДИМО ИСПОЛЬЗОВАТЬ ТОЛЬКО ИНСТРУКЦИЮ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА!!!

 



Источник: labdiagnostics.ru


Добавить комментарий