Креатинин в моче иммунохроматографический тест

Креатинин в моче иммунохроматографический тест

Анализ мочи на наркологические вещества может подтвердить факт употребления наркотиков или опровергнуть его. К нему прибегают при подозрении в приеме запрещенных веществ и для контроля людей, страдающих наркотической зависимостью. У начинающих могут отсутствовать внешние признаки употребления запрещенных веществ. Следов инъекций тоже может не быть из-за разнообразия наркотиков. Если заподозрили неладное — сделайте анализы. Знание положения вещей дает шанс предотвратить развитие зависимости от наркотиков на ранней стадии их употребления. Для исследования достаточно 50-100 мл мочи, собранной в чистую сухую емкость. Плотно закрытый сосуд надо сдать в лабораторию как можно скорее или хранить в замороженном виде не более 2 месяцев. Анализ выявляет наркотик и продукты его метаболизма.

Иммунохроматографический (ИХА) экспресс-метод исследования может обнаружить следы 14 видов наркотиков, если человек их употреблял в течение последних 5 суток. Он базируется на проведении мочи через абсорбенты. Искомый элемент или продукты его распада при взаимодействии с антителами образует пару: антиген-антитело, которая меняет цвет полоски-теста. Слабая концентрация анализируется другим антигеном, окрашивающим контрольную зону. В результате, количество искомого вещества фиксируется при закрашивании той или иной зоны. О системном приеме наркотических средств свидетельствует 2 маркера. Лаборатория выдает результат исследования в день сдачи материала.

Тесты на употребление наркотических веществ можно провести самостоятельно в домашних условиях. Они представляют собой полоски, пропитанные индикаторными веществами. Как провести тестирование дома? Перед применением урину надо выдержать 10 минут при комнатной температуре, после чего 15-20 мл влить в чистую сухую емкость. Набор для исследования содержит инструкцию и запаянный планшет для разового анализа. Планшет распечатывают, на нем написаны названия наркотиков, напротив каждого из которых тестовые окошки для визуальной оценки результата. Планшет освобождают от колпачка и опускают в мочу вертикально до ограничительной линии на 30 секунд, после чего анализатор вынимают, надевают колпачок и оставляют лежать на ровной горизонтальной поверхности. Через 5 минут (но не позднее 10) можно оценить результат реакции. Если в тестовых зонах появились 2 полоски — в моче наркотиков нет. Если обнаружена 1 полоса, она же контрольная, — результат положительный. Отсутствие полосы в тестовом окошке говорит о выявлении соответствующего наркотика.

В аптеке можно приобрести следующие тесты:

  • ИХА-3 — набор полосок для одновременного выявления в моче морфина, марихуаны, амфетамина;
  • ИХА-6 — может обнаружить 6 наркотических веществ в моче (морфин, амфетамин, марихуану, метамфетамин, кокаин, бензодиазепин).

Аналогичные исследования в домашних условиях можно провести на выявление 1,3, 5 и 10 видов наркотических средств. Количество выявляемых наркотиков и их названия указаны на упаковке. Самый простой и дешевый — тест на марихуану. Отличаться в применении они могут лишь способом контактирования с мочой: одни кладут на ровную поверхность и наносят жидкость пипеткой, другие в нее погружают. При покупке теста следует обратить внимание на срок годности.

Если результаты тестов доказали факт употребления наркотических веществ, можно сделать химико-токсикологический анализ мочи. Это более дорогостоящее исследование проводят, чтобы, во-первых, исключить ошибку при первом тестировании и, во-вторых, чтобы выявить конкретный употребленный наркотик. Результат анализа выдают в течение 3-7 дней. Химико-токсикологический анализ показывает уровень концентрации наркотиков в урине, то есть насколько человек зависим от данного наркотического вещества. Эти данные необходимы для проведения детоксикации.

К химико-токсикологическим относятся следующие анализы мочи:

  • поляризационно-флюоресцентный иммуноанализ (ПФИА) на выявление опиатов, метадона, каннабиноидов, амфетамина, кокаина, барбитуратов, фенциклидина, бензодиазепина;
  • иммуноферментный (ИФА).

Одновременно с анализами мочи на наркотики заказывают ее общий анализ. Он не выявляет содержание запрещенных веществ, но показывает состояние почек, нарушения или заболевания в организме. Наркотики разрушают жизнь. При получении положительного результата нельзя медлить с визитом к врачу, поскольку развивающиеся при их регулярном употреблении физиологические и психические нарушения могут оказаться необратимыми.

Сколько времени после употребления наркотики будут обнаружены в моче?

Марихуана после разового применения держится в ней 3-7 дней. Если ее употребляли долго и систематично, следы распада можно будет обнаружить через несколько недель — все зависит от регулярности дозировок, роста и веса пациента, а также особенностей обмена веществ его организма.

Кокаин и экстази выводятся с мочой 2 суток, амфетамин и метамфетамин — до 3 суток.

Сроки, на протяжении которых можно выявить наркотики в моче, зависят от того, насколько правильно была собрана и как хранилась моча.

При проведении анализов мочи на наркотики как в домашних, так и в лабораторных условиях возможны погрешности. Любая выверенная методика проведения исследований может выдать как ложно-положительный, так и ложно-отрицательный результат.

Анализ будет не точным, если после применения наркотика испытуемый употреблял очень много жидкости. В этом случае рекомендуется дополнительно проверить кровь. Исследование мочи на наркотики в личных целях может проводиться анонимно, но если результат анализа планируется как юридический факт, необходимо иметь паспорт или другой документ, удостоверяющий личность. В этом случае забор материала проводят в условиях, исключающих возможность подменить его.

Одним из достоверных является анализ волос, в зависимости от длины которых можно определить, употреблял ли человек наркотические вещества последние полгода. Пучок (не менее 100 штук) отстригают у самых корней. Если проведенный анализ показал положительный результат, а вы знаете, что не употребляли наркотические вещества и их следов никак не может быть в вашем организме, используйте другие методы и отстаивайте свои права.

источник

Что представляет собой иммунохроматографический анализ (ИХА)? Разберемся подробнее в этом вопросе.

ИХА – иммунохимический способ анализа, который основан на методе тонкослойной хроматографии. Он включает реакцию между соответствующим антителом и антигеном в биологических материалах. Осуществляется посредством особых тест-полосок, тест-кассет или панелей. ИХА – это экспресс-тест.

Действие его основывается на том, что при погружении в биологическую жидкость (либо другой жидкий образец) теста она начинает двигаться вдоль полоски по методу тонкослойной хроматографии. Движутся вместе с ней нанесенные на нее специфические меченые антитела, которые связываются аффинно с анализируемым компонентом.

Различаются два формата анализа: прямой и конкурентный метод.

В формате сэндвичного (прямого) иммунохроматографического анализа крови используется конъюгат антитела-метки, который наносится для конъюгата на мембрану. Иммобилизованные антитела на полоске, обладающие конкретным аналитом, на контрольной линии – антитела антивидовые, специфические к антителам первичным.

При внесении образца, в котором содержится конъюгат (искомое вещество), на мембрану, связывается искомый компонент с конъюгатом Ат-метки. После этого сформированный иммунный комплекс проникает в тестовую зону, где происходит связь со специфическими антителами, и образуется «сэндвич» Ат- Аг-Ат-метка. Затем чрезмерное количество не связавшегося конъюгата соединяется на контрольной линии с антивидовыми антителами. Если на тест-полоске появляются две линии, то результат теста положительный. Если аналит отсутствует в образце, то связывается конъюгат с антивидовыми антителами лишь на контрольной линии, и образуется одна линия.

Прямой ИХА применяется для определения возбудителей инфекционных патологий, вирусов – высокомолекулярных соединений, включая разные гормоны, ВИЧ.

Способ конкурентного иммунохроматографического анализа применяется для установления низкомолекулярных соединений. Основан он на конкуренции иммобилизованного конъюгата аналит и аналита: носитель-белок за ограниченное число центров связывания периферических антител, которые содержатся в конъюгате Ат-метка. Когда наносится образец, содержащий аналит, то последний связывается на мембране с конъюгатом с конъюгатом Ат-метка. Иммунокомплекс в дальнейшем проходит через тестовую зону, в которой иммобилизуется конъюгат аналит, то есть белок-носитель.

С этим конъюгатом не может связаться иммунокомплекс из-за стерических сложностей: низкомолекулярные соединения чаще всего обладают одной антигенной детерминантой, таким образом, у иммуноглобулинов есть один центр связи с антигеном, который уже занят до этого аналитом. Иммунный комплекс впоследствии связывается антивидовыми иммуноглобулинами, которые находятся на контрольной линии. Если в тестовой области отсутствует окрашенная полоса и есть окраска в контрольной зоне, это говорит о том, что содержание определяемого компонента в исследуемом образце выше порогового значения для такого теста. Если в аналите отсутствует анализируемое вещество в образце, то происходит связь конъюгата Ат-метка с конъюгатом Аг: носитель-белок, иммобилизованный в области тестовой линии. Ат-метка свободный конъюгат попадает в сферу контрольной линии, где связывается с антивидовыми антителами. Если есть две окрашенные линии (контрольная и тестовая), то можно говорить об отрицательном результате теста.

Метод конкурентного ИХА применяется для определения низкомолекулярных соединений, включая тканевые экстракты.

Преимущество такого способа – легкость и быстрота использования, возможность применения неприборных методов ИХА с оценкой результата визуально. Не требуется дополнительное оборудование, и анализ может провести человек без медицинского образования в любое время.

В иммунохроматографическом анализе в качестве меток применяются разные частицы и вещества.

  • Красители (частицы крашеного латекса, или наночастицы углерода, или коллоидного золота). Такой вариант позволяет визуально отслеживать результат или определить колориметрическим прибором. Применение красящих меток, которые присоединяются к носителю, позволяет делать мультианализ, где разноцветные линии соответствуют разным аналитам. Используемой меткой чаще всего выступают наночастицы золота коллоидного.
  • Связанные ковалентно с латексными частицами биолюминесцентные, фосфоресцентные и флуоресцентные метки. Применяются лишь в приборных способах ИХА, в которых регистрируется результат особым ридером. Наиболее распространенными являются флуоресцентные метки.
  • Парамагнитные метки, закрепленные на латексных частицах. Метод применяется в ИХА с использованием приборов, которые регистрируют силу магнитного поля.
  • Липосомы, используемые в качестве носителей разных меток (электроактивных, ферментативных, флуоресцентных, красящих и т. д.) Это новое направление среди разновидностей анализа.
  • Ферментные метки, применяемые по принципу ИФА. Регистрация реакции проводится посредством окрашивания субстратов. В итоге получается визуальный результат, либо считывается ридером.

Главными преимуществами применения метода иммунохроматографического анализа становятся:

  • Удобство и простота – позволяет получить результат (первичное представление и анализ причины болезни) без специальных навыков и оборудования.
  • Надежность – достоверность тестов достигает 99,8 %, каждый тест при этом имеет внутренний встроенный контроль.
  • Анонимность – это особенно важно при определении болезней, передаваемых половым путем, прочих инфекционных болезней, а также установлении употребления наркотических веществ.
  • Экономичность – приобрести тест может каждый, экономится время на проведение анализа.
  • Независимость – не нуждается в предварительной консультации и рецепте врача.

Самой популярной услугой становится анализ мочи на наркотики посредством метода иммунохроматографического анализа. Это позволяет исследовать мочу на 14 видов нарковеществ.

Иммунохроматографический анализ на наркотики также считается экспресс-методом диагностики. Результат теста можно узнать спустя 15 минут. Для проведения данного исследования используют особые тест-полоски, которые пропитаны веществами-индикаторами. Если в моче имеются следы наркотического вещества, цвет полоски меняется. Основной недостаток такого анализа – невозможность определить, какова концентрация вещества и степень наркотического опьянения, таким образом, результаты иммунохроматографического анализа в качестве доказательства в суде использовать не получится.

Если на индикаторах появились две розовые полосы, то делается заключение, что в моче не содержится наркотик, или же его концентрация недостаточна для определения иммунохроматографическим методом. При возникновении одной розовой полосы можно говорить о наличии наркотического вещества: марихуаны, производных эфедрона, опиатов, производных барбитуровой кислоты, амфетаминов, кокаина, фенциклидина, бензодиазепинов, экстази.

Иммунохроматографический анализ (экспресс-тест) является эффективным средством диагностики, он позволяет визуально на протяжении нескольких минут выявить и оценить концентрацию антигенов, гормонов, антител и других диагностически важных компонентов в человеческом организме. Экспресс-тесты имеют высокую степень точности и чувствительности, обнаруживается более ста видов болезней, а также весь спектр наркотических веществ, и достоверность анализа очень высокая.

источник

Экспресс-тест RELY® H. pylori компании EKF Diagnostics помогает минимизировать использование неподходящих протоколов лечения и может помочь снизить риск развития более серьезного заболевания. После короткого и преходящего клинического .

Rely® Mono Rapid Test представляет собой простой, быстрый и экономичный тест на инфекционный мононуклеоз — иногда его называют мононуклеозом или железистой лихорадкой. Раннее выявление инфекционного мононуклеоза помогает .

ProDetect™ Syphilis Rapid Test — это быстрый и удобный иммунохроматографический анализ, используемый для качественного выявления антител к бледнотелам трепонемы в образцах крови человека. Предназначен для профессионального .

. Antigen Rapid Test — это быстрый иммунохроматографический тест для визуального скрининга антигена денге NS1 в цельной крови, сыворотке или плазме человека, который помогает в диагностике инфекции денге. ProDetectTM Dengue .

Быстрый иммунохроматографический тест ProDetectTM Dengue IgG/IgM — это быстрый иммунохроматографический тест для визуального скрининга антител денге IgG/IgM в цельной крови, сыворотке или плазме человека, который помогает в диагностике .

Комплект для анализа на антитела Treponema Pallidum (TP) Коллоидным методом золота Основываясь на на нанометрической коллоидной иммунной хроматографии золота, наборы используют метод двойного антигена сэндвич для обнаружения антител .

Основываясь на на нанометрической коллоидной иммунной хроматографии золота, наборы используют метод двойного антигена сэндвич для обнаружения вируса иммунодефицита человека Антитела в образцах сыворотки или плазмы крови Простота эксплуатации, .

Набор для анализа на антитела вируса гепатита С (ВГС) Коллоидным методом золота Основываясь на на нанометрической коллоидной иммунной хроматографии золота, наборы используют метод двойного антигена сэндвич для обнаружения антител вируса .

СКРИНИНГОВАЯ ЧАШКА 8+A+A+AD Экспресс-тест для одновременного, качественного выявления множества лекарственных препаратов и метаболитов медикаментов в моче человека, в том числе для медицинских работников в местах оказания медицинской .

СКРИНИНГОВАЯ ЧАШКА 8+AD Экспресс-тест для одновременного, качественного выявления множества лекарственных препаратов и метаболитов медикаментов в моче человека, в том числе для медицинских работников в местах оказания медицинской помощи. .

ЭКРАН K2/SPICE Скрининговый тест на лекарства K2/Spice Test является иммунохроматографическим тестом, основанным на тестировании in vitro. Он предназначен для качественного определения основных метаболитов синтетического .

Преднамеренное использование Тест Trinity Biotech Uni-Gold™ Legionella Urinary Antigen PLUS представляет собой быстрый иммунохроматографический анализ для качественного выявления антигена группы 1 Legionella pneumophila (L.pneumophila) .

Быстрая альтернатива агарозному гелевому электрофорезу ДНК Компания LFDAbingdon Health производит иммуноферментные анализы бокового потока нуклеиновой кислоты (NALFIA), называемые PCRD, которые могут быть использованы в качестве альтернативы .

Быстрый промоутер Тест в месте оказания медицинской помощи (начиная с цельной крови или сыворотки крови), позволяющий клиницистам быстро и полностью децентрализованно обнаруживать антинфликсимабные антитела, способствуя немедленному принятию .

Alere BinaxNOW® Influenza A & B Card — иммунохроматографический анализ in vitro для качественного выявления антигенов нуклеопротеинов гриппа А и В в пробах для носоглотки, пробах для носа и пробах для промывки носа/аспирата. Он предназначен .

Описание CerTest Rotavirus one step card test — это цветной хроматографический иммуноферментный анализ для качественного обнаружения ротавируса в образцах стула. Тест ротавирусной карты CerTest Rotavirus Card предлагает .

. вспомогательного средства при диагностике инфекции H.pylori. Любой реактивный образец с экспресс-тестом Microgen® Helicoscreen Rapid Test должен быть подтвержден альтернативными методами испытания и клиническими данными. Простота .

BioTracer™ HBsAg Rapid Card — это иммунохроматографический тест, основанный на одношаговой диагностике in vitro для качественного определения HBsAg в сыворотке крови или плазме крови человека — поверхностная чувствительность вируса гепатита .

Быстрый, одношаговый тест для качественного обнаружения метаболитов кокаина в моче человека. Только для профессиональной диагностики in vitro. ЗАЯВЛЕННЫЙ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ Одноступенчатая проба кокаина COC (моча) — это быстрый хроматографический .

Преднамеренное использование: RIDA®QUICK Legionella — иммунохроматографический экспресс-тест для качественного выявления антигенов легионеллы пневмофилы в образцах мочи Общая информация: Болезнь легионеров — это острая респираторная .

NG-Test Malaria Pf/Pan (pLDH) — иммунохроматографический анализ in vitro с использованием цельной человеческой крови для качественного определения богатого белка гистидина-2 (Pf HRP-2), специфичного для штамма Plasmodium .

Набор для тестирования на малярию OptiMAL-IT Дифференцирует Plasmodium falciparum и другие виды Plasmodium Точный результат за 20 минут Мониторинг эффективности лечения пациентовОптиМАЛ-IT — это быстрый, чувствительный тест на малярию, .

Один шаг Тест на вирусный гепатит A Вирусные антитела SD BIOLINE HAV IgG/IgM экспресс-тест представляет собой твердофазный иммунохроматографический анализ для быстрого, качественного и дифференциального обнаружения антител к HAV в сыворотке .

Одношаговая тест-полоска для овуляции ЛГ Характеристики/принципы продукта: ◤Characteristics 1. Продукт имеет хорошую однородность и точный результат. Точность составляет более 99%, 2. После нанесения образца фон становится ясным, а .

Моноцитогенетический тест Biomerica Listeria представляет собой иммуноферментный анализ бокового потока для быстрого определения наличия моноцитогенов Listeria в образцах стула человека. Тест предназначен только для профессионального использования.

источник

Вид товара: Медицинские изделия
Производитель: ФАКТОР-МЕД ООО
Страна происхождения: Россия
Форма выпуска и упаковка: Тест-полоска индикаторная — 1 шт, упакованная в индивидуальную вакуумную упаковку из фольги алюминиевой с осушителем.
Хранить в сухом месте: Да
Хранить при комнатной температуре 15-25 градусов: Да
Беречь от детей: Да
Все аналогичные товары

В состав Теста входит Полоска индикаторная для иммунохроматографического выявления барбитуратов в моче

ПОЛОСКА Д/ИММУНОХРОМ ВЫЯВЛЕН БАРБИТУРАТОВ В МОЧЕ/ИХА-БАРБИТУРАТЫ-ФАКТОР/

Для профессионального применения и самотестирования.

Полоска предназначена для in vitro одиоэтапного быстрого качественного выявления барбитуратов (и их метаболитов) в моче человека методом иммунохроматографического анализа.

Одна Полоска ИХА-БАРБИТУРАТЫ-ФАКТОР рассчитана на проведение одного определения наличия барбитуратов (или их метаболитов) в моче человека.

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа, при котором анализируемый образец абсорбируется поглощающими участками Полоски; при наличии в образце барбитуратов (ил и их метаболитов) он вступает в реакцию со специфическими моноклональными антителами к барбитуратам, связанными с частицами коллоидного золота, образуя комплекс антиген-антитело. Этот комплекс вступает в реакцию конкурентного связывания с конъюгатом барбитуратов, иммобилизованным в тестовой зоне Полоски, и в том случае, если концентрация барбитуратов (или их метаболитов) в анализируемом образце мочи ниже порогового уровня, в тестовой зоне Полоски образуется две параллельные линии розового цвега, что указывает на отрицательный результат. В случае присутствия в анализируемом образце мочи барбитуратов (или их метаболитов) в концентрации, равной пороговому уровню или превышающей таковой, в тестовой зоне Полоски образуется одна линия розового цвета, что указывает на положительный результат анализа.

Чувствительность определения (минимально определяемая концентрация) составляет не более 300 нг/мл барбитуратов (или их метаболитов).

Время проведения анализа — 5 минут. Нельзя учитывать полученные результаты позднее, чем через 10 минут после проведения анализа.

Наличие в моче в концентрации 10 мкг/мл других наркотических соединений (морфин, каннабинол, амфетамин, фенциклидин, деоксиэфедрин, бензодиазепин, метамфетамин и фенобарбитал) не мешает определению барбитуратов (или их метаболитов).

Тест-полоска для иммунохроматографического анализа (ИХА)

Потенциальный риск применения Полоски — класс 2а.

Полоска ИХА-БАРБИТУРАТЫ-ФАКТОР предназначена только для in vitro диагностики.

Все компоненты Полоски в используемых концентрациях являются нетоксичными

При работе с Полоской следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые перчатки, так как исследуемые образцы мочи человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные содержать возбудители любых инфекций

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА

емкости для анализируемых образцов мочи;

Свежесобранная моча человека, не содержащая консерванты.

Пробы мочи до определения можно хранить при температуре +2-8°С не более 2 суток. При необходимости более длительного (до 3 месяцев) хранения — при температуре минус 20°С и ниже

Анализируемые образцы мочи человека и используемые Полоски (Полоски в планшете) перед проведением анализа должны быть выдержаны при комнатной температуре (+18- 25°С) в течение времени не менее 10 минут.

Полоска. Вскрыть упаковку Полоски, разрывая ее вдоль прорези, извлечь Полоску и погрузить ее строго вертикально концом со стрелками в мочу до уровня ограничительной линии на 20-30 секунд. Извлечь Полоску, поместить ее на горизонтальную чистую ровную сухую поверхность тестовой зоной вверх и через 5 минут визуально оценить результат реакции.

Полоска. Выявление в тестовой зоне одной линии розового цвета свидетельствует о положительном результате анализа, те. указывает на то, что в анализируемом образце мочи концентрация амфетамина (или его метаболитов) равна или выше порогового значения. Выявление в тестовой зоне двух параллельных линий розового цвета свидетельствует об отрицательном результате анализа, те. указывает на то, что в анализируемом образце мочи амфетамина (или его метаболитов) нет или же их концентрация ниже порогового значения

В случае если в течение 5 минут в тестовой зоне Полоски линии розового цвета не выявляются, результат анализа признается недействительным, при этом анализ следует повторить с использованием другой Полоски.

Замораживание не допускается.

После вскрытия упаковки полоска должна быть использована в течение 2 ч при хранении в сухом месте при комнатной температуре.

До проведения анализа возможно хранение образцов мочи при температуре +2-8° С не более 2 суток.

При необходимости более длительного хранения (до 3 месяцев) — при температуре минус 20°С и ниже.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению Полоски.

для иммунохроматографического выявления барбитуратов в моче

  • Купить Полоска д/иммунохром выявлен барбитуратов в моче/иха-барбитураты-фактор/ в Москве можно в удобной для вас аптеке, сделав заказ на Apteka.RU.
  • У нас низкая цена на Полоска д/иммунохром выявлен барбитуратов в моче/иха-барбитураты-фактор/ в Москве.

Ближайшие к вам пункты доставки в Москве вы можете посмотреть здесь.

Вскрыть пакет и достать полоску.

Опустить в ёмкость с мочой полоску стрелками вниз до ограничительной линии на 20-30 секунд

Положить полоску на сухую горизонтальную поверхность тестовой зоной вверх

Оценить результат реакции визуально через 5 минут.

источник

Химическое обследование урины выполняется, чтобы качественно и полуколичественно выявить компоненты, обладающие способностью растворяться в воде и при нормальном состоянии в биожидкости отсутствующие.

Попадание в урину подобных элементов говорит о наличии патологических отклонений парного органа или свидетельствует о нарушении процесса метаболизма. Для проведения исследования предпочтение отдается утренней урине, потому что она считается максимально концентрированной. Проверка позволяет практически полностью исключить негативные показатели.

Диагностические тест-полоски для анализа мочи представляются одним либо несколькими химическими реактивами, используемыми для исследований в стационарных лабораториях. Они нанесены на пластиковую либо плотную бумажную основу, размеры составляют шесть на тринадцать сантиметров при пятимиллиметровой толщине.

Реагент является индикатором для тестирования, способным изменять собственный оттенок, контактируя с осадковыми компонентами, находящимися в биологической жидкости.

Реагентный индикатор выбирается с учетом того, что за тип патологии следует обнаружить. Бывают полоски только с одним нанесенным реактивом. Их называют одноиндикаторными, можно проверить уровень содержания только одного элемента.

Существуют тест-полоски с целой шкалой разных реактивов, предназначенных для выполнения комплексного обследования. Такие тесты называются мультииндикаторными.

В комплект теста включены:

  • тубус из пластикового материала, в котором может храниться от двадцати пяти до ста пятидесяти полосок;
  • подробная инструкция по применению;
  • сорбентное вещество, поглощающее излишки влаги;
  • коробочка из картона;
  • шкала с разноцветными оттенками, при помощи которой интерпретируются показатели анализа урины. В большинстве случаев такая шкала наносится на поверхность тубуса.

Полоски предназначаются для проведения быстрого анализа урины не только в домашних условиях, но и с использованием анализаторов, помогающих определять характеристики биологического материала.

Определение качественного показателя подразумевает выявление определенного компонента, подтверждающего наличие той или иной патологии. Изменения оттенка индикаторного элемента однозначно заявляет о наличии метаболита и относится к реакции положительного характера. Полуколичественный показатель подразумевает определение объема выявленных включений методом визуализации уровня окраски реактивного элемента.

Используют тест-полоски для организации контроля состояния выявленного ранее заболевания и для обнаружения новых патологических отклонений. К ним относятся:

  • диабет;
  • глюкозария женщин в период беременности;
  • болезни инфекционного характера в мочеточных каналах;
  • неинфекционные поражения путей вывода урины;
  • образование конкрементов.

На сегодняшний день изготовлением полосок для проведения тестов занимаются многие страны. В числе известных компаний можно назвать:

  • российские – «Биоскан» и «Биосенор»;
  • корейская – Uriscan;
  • канадская – Multicheck;
  • швейцарская – Mcral-Test;
  • американская – UrineRS.

Любой изготовитель предоставляет обширный перечень наборов для диагностирования, помогающих проверить разнообразные параметры:

Сочетание индикатора из нескольких реагентных элементов на одном тесте дает возможность оптимизировать выполнение диагностирования, учитывая преследуемые цели. К примеру, для контроля уровня сахара при диабете, на тест-полоску наносится индикаторный элемент, реагирующий на глюкозу и кетоны. В случаях с симптоматикой на диабетическую нефропатию, рекомендуется воспользоваться полосками, совместившими в себе индикаторы:

Считается, что любой изготовитель производит тест-полоски, используемые не только при визуальных обследованиях, но и при инструментальных, когда применяются анализаторы.

Проводя тест-проверку, рекомендуется придерживаться определенных правил, отклонение от которых способно привести к получению ложных показателей:

  1. Не прикасайтесь к индикаторной части полоски.
  2. Проводите процедуру при температуре пятнадцать – двадцать пять градусов тепла. При более холодных условиях скорость реакции существенно снижается, что влечет за собой ложные результаты.
  3. Если урина находилась в холодильной камере, ее необходимо подогреть до нужного температурного режима.
  4. Хранение биологической жидкости, отобранной для проверки, более двух часов запрещается. В противном случае физико-химические показатели урины изменяются.
  5. Запрещается повторное использование одной полоски.
  6. Не рекомендуется погружать индикатор в урину на долгое время – есть вероятность вымывания реагентного элемента с поверхности полоски.
  7. Вскрыв упаковку, все тесты необходимо использовать в определенный производителем срок – не позднее шести месяцев.
  8. Не подвергайте шкалу долгому воздействию ультрафиолета, чтобы тона не выцветала.

Весь процесс выполнения экспресс-анализа условно делится на несколько этапов:

  1. Полоска извлекается из тубуса, крышка плотно закрывается.
  2. Приготовленная для анализа урина тщательно перемешивается, чтобы предотвратить образование осадка и создать возможность для получения более точных результатов.
  3. Индикатор погружается в биологическую жидкость на одну – три секунды.
  4. Вынув тест, необходимо удалить излишнюю мочу, постукивая ребром полосочки по краю посуды.
  5. Ожидая результат реакции, которая длится от тридцати секунд до трех минут (зависит от проверяемых параметров и рекомендаций изготовителя), полоска выкладывается на чистую поверхность индикаторной частью вверх.
  6. Уточнение показателей выполняется сопоставлением полученных показателей с цветной шкалой, прилагающейся к комплекту.

Попробуем рассмотреть наиболее известные компоненты урины, которые возможно проверять, используя тест-полоски, изучим их характеристики.

Лейкоцитный индикатор используется при выявлении воспалений в мочеточных каналах – цистита, пиелонефрита, гломерулонефрита. Как только реагент, нанесенный на тест, вступает в реакцию, изменяется оттенок шкалы. Реакция считается положительной, если желтый цвет станет пурпурным.

Ее наличие в урине называется глюкозурией. Показатель подтверждает превышение количества глюкозы в клетках крови по отношению к почечному порогу. Такая ситуация возможна при диабете либо гликозурии почек, когда нарушен механизм реабсорбации канальцевого типа.

Тестовые полоски удобны при уточнении уровня глюкозы, потому что содержат в индикаторе фермент глюкозооксидазы и пероксидазы, вступающих в реакцию с глюкозой и образующих смену цветовой гаммы с зеленой на коричневую.

Превышение сахара в урине беременной женщины не всегда подтверждает появление диабета. Иногда это вызвано временными отклонениями в работоспособности парного органа.

Это результат, получаемый после окисления жиросодержащих кислот. Увеличение концентрации кетоновых тел образуется по причине нехватки углеводов либо неспособности тканей перерабатывать глюкозу. Такое состояние, когда повышается уровень кетонов, называют кетоацидозом. Его возникновение подтверждается изменениями оттенка полоски со светло-розового на бордовый.

Тест-полоски для выявления данного компонента используются главным образом при возникновении подозрений на недостаточность парного органа. Процесс реакции основан на возможности тетрабромфенола, находящегося в составе реагента, взаимодействовать с белками, выдавая в результате окрашенный комплекс.

Шкала с индикатором в случае выявления гематурии бывает с одним либо с двумя секторами, которые реагируют исключительно на гемоглобин. Нижайший к определению уровень способен варьироваться, составляя пять – десять эритроцитов в 1 мкл и десять миллиграмм гемоглобина в 1 мкл.

Если реакция заканчивается положительно, и оттенок реагента изменяется, в первой части сектора наблюдаются точки, а вторая половина окрашивается равномерным оттенком темно-зеленого либо синего цвета.

С учетом того, что при гематурии зачастую в урине появляется белок, рекомендуется пользоваться полосками, совмещающими реактивы по гематурии и протеинурии.

Присутствие в урине крови довольно часто является причиной инфекции либо травмирования мочеточного канала, кровотечения в парном органе.

Уточнение уровня кислотности урины в домашней обстановке считается делом простым. Показатель кислотности биологического материала определяет, какой вид солей преобладает, что считается весьма важным при исследовании и последующем лечении мочекаменного заболевания. При замере уровня кислотности оттенок индикаторной линейки варьируется с оранжевого цвета до зелено-голубого.

Проверка урины на этот показатель проводится при обследовании наркоманов или спортсменов, которые подозреваются в приеме допинговых препаратов.

При норме удельна масса мочи считается 1.010 – 1.025. Увеличение плотности может наблюдаться во время воспалительных процессов в почках, диабете, недостаточности парного органа.

Увеличение их содержания подтверждает отклонения в работе печени и желчных каналов. Шкала замера имеет минимальный уровень в 2 мг/л, а максимальный показатель равен 80-ти. Рост содержания этих элементов вызовет увеличение насыщенности окраски индикаторной линейки. Положительные показатели проверки на билирубин подтверждают наличие либо развитие гепатита.

Тесты на данный элемент используются в случаях, когда есть симптоматика на отклонения в работе почек, сбои гормонального характера, диабет. Креатинин принимает активное участие в энергетическом обмене клеток тканей, его уровень зависит от массы мышц.

Исходя из того, что мышечный показатель остается практически неизменным, то и уровень креатина будет постоянным. Увеличение его в моче вызывается недостаточностью почек, обезвоживанием организма, диетпитанием с преобладанием мяса, нагрузками физического характера.

Их выявление в биожидкости может вызывается двумя причинами:

  • в процессе жизни и деятельности вредных паразитов (в подобной ситуации врач определяет бактериурию);
  • из-за употребления продуктов питания, в которых содержится много нитратов.

В большинстве случаев выявление нитритов подтверждает развитие урогенитального инфекционного заболевания.

Хоть метод использования полосок отличается при тестировании простотой и доступностью, все же остается серьезная доля вероятности, что полученные показатели окажутся ложными. Но если строго выполнять все правила применения средств для индивидуального диагностирования, то риски ошибок можно минимизировать.

источник

ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ ТЕСТ МОЧИ, КАК ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЙ МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ ГРУППЫ ОПИЯ С.С. Катаев, В.П. Гаранин, И.Ю. Смирнова Пермь

Нами проведена сравнительная оценка использования методов иммунохроматографического анализа (ИХА) и тонкослойной хроматографии (ТСХ), как предварительного метода анализа мочи на наличие алкалоидов группы опия. В качестве подтверждающего метода использовали хромато- масс-спектрометрию (ГХ/МС).
Метод ИХА является одностадийным иммуноферментным тестом и основан на конкурентном связывании исследуемого вещества на мембране иммунохроматографического абсорбционного устройства.
Исследование проводилось в сравнении с традиционным анализом на алкалоиды группы опия — методом ТСХ после кислотного гидролиза мочи и жидкость-жидкостной экстракции.
Материалы и оборудование. Реактивы и растворители градации хч. Реактивы Марки и Фреде свежеприготовленные. В качестве метчиков для ТСХ использовали 1% спиртовые растворы морфина гидрохлорида (ФС 413 ГФ X) и кодеина основания (ФС 170 ГФ X). Пластинки для ТСХ — “Сорбфил- ПТСХ-В-УФ” (ЗАО “Сорбполимер”, Россия). Иммунофермент- ные тесты для качественного экспресс-определения опиатов в моче DRuG Screen OPIATES Test (DRG International Ink, США) регистрационное удостоверение МЗРФ № 98/1415 от 27.10.98 на диагностический набор реагентов для экспресс- диагностики содержания наркотических веществ в моче. Термоблок ПЭ-4030 (ОАО “Экрос”, Россия). Газовый хроматограф НР5890 серии II с масс-селективным детектором НР5972А (Hewlett-Packard, США).
Процедуры и методы. ИХА исследование. Исследование проводили в соответствии с прилагаемой инструкцией.

Во флакон помещали 2 мл мочи, контролировали рН по универсальной индикаторной бумаге, доводили температуру до комнатной. В мочу помещали тестовую пластинку, через 30 секунд пластинку вынимали и помещали на ровную горизонтальную поверхность. Результат определяли в интервале 5-10 минут. При наличии одной окрашенной полосы в контрольной зоне фиксировали положительный результат. При наличии двух полос в контрольной и тестовой зонах фиксировали отрицательный результат.
Извлечение. К 10 мл мочи прибавляли 2 мл концентрированной соляной кислоты, флакон плотно закрывали и выдерживали 20 минут на кипящей водяной бане. После охлаждения гидролизат фильтровали через бумажный фильтр. К фильтрату прибавляли 25% водный раствор аммиака до рН9-10 и дважды экстрагировали смесью хлороформ-н-бутанол (9:1) порциями по 10 мл.

Органические фазы отделяли, объединяли и фильтровали через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Фильтрат упаривали до объема 8-9 мл, доводили до 10 мл хлороформом и разделяли на две аликвоты, соответствующие 8 и 2 мл мочи. Аликвоты экстракта упаривали досуха в токе теплого воздуха (60оС).
ТСХисследование. Сухой остаток аликвоты извлечения из 8 мл мочи растворяли в 100 мкл этанола и наносили поровну в стартовые зоны 1 двух хроматографических пластин, в зоны 2 наносили спиртовые растворы метчиков морфина и кодеина. После высыхания пятен, пластинки элюировали в системе растворителей этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17:2:1). Предварительное насыщение камеры 30 минут. Длина пробега элюента 8 см. Хроматограммы высушивали. Первую пластинку проявляли реактивом Марки (капель- но). Вторую — реактивом Фреде (капельно). При наличии окрашенных зон на уровне пятен метчиков морфина (краснофиолетовое пятно с hRf 24±2) и/или кодеина (синее пятно с hRf 33±3) фиксировали положительный результат.
ГХ/МС исследование. Сухой остаток аликвоты извлечения из 2 мл мочи растворяли в 1 мл хлороформа и реэкстраги- ровали 1 мл 0.1 н раствора соляной кислоты в течение 5 минут. Хлороформный слой отбирали и отбрасывали. К водной фазе прибавляли 0,5 г сульфата аммония и 25% водный раствор аммиака до рН 9-10, затем экстрагировали 2 мл смеси хлороформ-н-бутанол (9:1). Органическую фазу отбирали, переносили во флакон и упаривали досуха. К сухому остатку

прибавляли 100 мкл безводного пиридина и 100 мкл уксусного ангидрида. Флакон герметично укупоривали и нагревали в термоблоке 20 минут при 60оС. После охлаждения, флакон вскрывали и упаривали растворитель досуха. Сухой остаток растворяли в 100-200 мкл метиленхлорида и 1 мкл вводили в инжектор хроматографа. Температура инжектора 250оС. Капиллярная кварцевая колонка НР-5МБ 25 м Х 0,25 мм. Скорость потока газа носителя — гелия 1,5 мл/мин, без деления потока. Температура колонки программируемая: 2 минуты при 70оС с дальнейшим повышением до 270оС со скоростью 20оС/ мин, общее время анализа 20 минут. Температура интерфейса МСД 280оС. Ионизация электронным ударом с энергией электронов 70 эВ. Режим работы МСД — полное сканирование ионов от 45 до 450 атомных масс. Положительный результат фиксировали при наличии в хроматограмме ацетилированных производных морфина и/или кодеина. Время удерживания аце- тилкодеина 12,74 минуты (RI 2610), диацетилморфина 13,46 минуты (RI 2738). Чувствительность для морфина и кодеина не хуже 50 нг/мл мочи, для каждого.

источник

Срок исполнения: до 1 к.д. 3 — 5 ч.** Заказать Срочно Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Условия подготовки определяются лечащим врачом.

Нельзя собирать кал из памперсов, после клизмы, после введения ректальных свечей или приема медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника, с примесями мочи или выделений из половых органов.

Кал собирается после естественной дефекации на чистый лист бумаги или в чистую ёмкость (ёмкость предварительно вымыть с мылом, обдать кипятком, и высушить). Нельзя отбирать пробу из унитаза. Испражнения собираются специальной лопаточкой из разных мест, вмонтированной в крышку контейнера, в объёме примерно с грецкий орех.

Для исследований предпочтительно использовать утреннюю порцию фекалий. Следует избегать попадания кусочков непереваренной пищи и мочи. Крышку контейнера плотно закрутить.

Доставка в лабораторию в день взятия биоматериала.

Метод исследования: иммунохроматографический экспресс-тест.

Аденовирусы (Adenovirus) из семейства Аденовирусов (Adenoviridae) занимает второе место после ротавирусов, как причина появления острой диареи. Заболеть могут не только маленькие дети от 6 месяцев до 5 лет, но и взрослые. Больной человек, выделяющий вирусные частицы с носовой и носоглоточной слизью, является источником инфекции во время разгара, в более поздние сроки заболевания вирус выделяется с фекалиями. Вирусоносители принимают меньшее участие в распространении болезни. Заражение преимущественно происходит воздушно-капельным путем, фекально-оральным путем заражается небольшой процент людей. Известно более 90 сероваров вируса, этиологическое значение имеют только вызывающие инфекционное поражение глаз, органов дыхания, ЖКТ. Аденовирусная инфекция имеет выраженный полиморфизм клинических симптомов. Типичным проявлением является конъюнктивит с односторонним поражением, увеличение лимфатических узлов. Интоксикация и лихорадка протекают длительно, температура повышается до 38-39 °С и держится от 5 до 7 дней. Стул становиться водянистым, частота достигает 5-7 раз в сутки, может отмечаться рвота в первые дни заболевания. В острый период течение вирусных инфекций имеет сходную клиническую картину, на основании которой трудно провести дифференциальную диагностику между гастроэнтеритами (энтеритами), вызванными аденовирусами, ротавирусами, норовирусами, пациентов всегда необходимо проверять на наличие нескольких патогенов.

Определение антигенов вируса в кале с помощью иммунохроматографического экспресс-теста является простым, быстрым, неинвазивным и в то же время высокочувствительным и специфичным методом диагностики инфекций, а так же для предупреждения вспышек и их контроля. Данный метод основан на связывании антител на мембране тест-системы и антигенов, находящихся в образце пробы, с образованием комплекса «антиген-антитело».

Чувствительность и специфичность.

  • Специфичность >99%;
  • Чувствительность >90%.
  • первичная диагностика инфекции, особенно среди детей с наличием диарейного синдрома;
  • скрининговое исследование в местах вспышек ОКИ;
  • обследование взрослых с диарейным синдромом.

Пример результата (вариант нормы):

Параметр Референсные значения
Аденовирус (Adenovirus), качественное определение антигена (иммунохроматографический экспресс-метод) Не обнаружено

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

» [«serv_cost»]=> string(3) «860» [«cito_price»]=> string(4) «1720» [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) array(3) string(1) «Y» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(6) «Кал» > > >

Условия подготовки определяются лечащим врачом.

Нельзя собирать кал из памперсов, после клизмы, после введения ректальных свечей или приема медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника, с примесями мочи или выделений из половых органов.

Кал собирается после естественной дефекации на чистый лист бумаги или в чистую ёмкость (ёмкость предварительно вымыть с мылом, обдать кипятком, и высушить). Нельзя отбирать пробу из унитаза. Испражнения собираются специальной лопаточкой из разных мест, вмонтированной в крышку контейнера, в объёме примерно с грецкий орех.

Для исследований предпочтительно использовать утреннюю порцию фекалий. Следует избегать попадания кусочков непереваренной пищи и мочи. Крышку контейнера плотно закрутить.

Доставка в лабораторию в день взятия биоматериала.

Метод исследования: иммунохроматографический экспресс-тест.

Аденовирусы (Adenovirus) из семейства Аденовирусов (Adenoviridae) занимает второе место после ротавирусов, как причина появления острой диареи. Заболеть могут не только маленькие дети от 6 месяцев до 5 лет, но и взрослые. Больной человек, выделяющий вирусные частицы с носовой и носоглоточной слизью, является источником инфекции во время разгара, в более поздние сроки заболевания вирус выделяется с фекалиями. Вирусоносители принимают меньшее участие в распространении болезни. Заражение преимущественно происходит воздушно-капельным путем, фекально-оральным путем заражается небольшой процент людей. Известно более 90 сероваров вируса, этиологическое значение имеют только вызывающие инфекционное поражение глаз, органов дыхания, ЖКТ. Аденовирусная инфекция имеет выраженный полиморфизм клинических симптомов. Типичным проявлением является конъюнктивит с односторонним поражением, увеличение лимфатических узлов. Интоксикация и лихорадка протекают длительно, температура повышается до 38-39 °С и держится от 5 до 7 дней. Стул становиться водянистым, частота достигает 5-7 раз в сутки, может отмечаться рвота в первые дни заболевания. В острый период течение вирусных инфекций имеет сходную клиническую картину, на основании которой трудно провести дифференциальную диагностику между гастроэнтеритами (энтеритами), вызванными аденовирусами, ротавирусами, норовирусами, пациентов всегда необходимо проверять на наличие нескольких патогенов.

Определение антигенов вируса в кале с помощью иммунохроматографического экспресс-теста является простым, быстрым, неинвазивным и в то же время высокочувствительным и специфичным методом диагностики инфекций, а так же для предупреждения вспышек и их контроля. Данный метод основан на связывании антител на мембране тест-системы и антигенов, находящихся в образце пробы, с образованием комплекса «антиген-антитело».

Чувствительность и специфичность.

  • Специфичность >99%;
  • Чувствительность >90%.
  • первичная диагностика инфекции, особенно среди детей с наличием диарейного синдрома;
  • скрининговое исследование в местах вспышек ОКИ;
  • обследование взрослых с диарейным синдромом.

Пример результата (вариант нормы):

Параметр Референсные значения
Аденовирус (Adenovirus), качественное определение антигена (иммунохроматографический экспресс-метод) Не обнаружено

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

источник

Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,

К иммунохимическим методам относится также метод иммунохроматографического анализа (ИХА, экспресс-тесты) – качественный скрининговый предварительный метод, позволяющий быстро, в течение нескольких минут, провести анализ в любых условиях, в т.ч. «полевых» [17]. Этот метод заслуживает наиболее пристального внимания, т.к. является самым распространенным при выявлении ПАВ и не требует оборудования и специалистов для проведения. Экспресс-тесты используют в химико-токсикологических лабораториях для скрининга, при прохождении медосмотров при устройстве на работу, при тестировании абитуриентов и студентов вузов. Метод может использоваться для тестирования водителей на дорогах, в домашних условиях родителями для контроля детей. Объектами исследования в данном случае являются моча, жидкость ротовой полости, потожировые выделения (редко).

К преимуществам ИХА следует отнести:

● быстроту и легкость в использовании;

● малые объемы образца, отсутствие пробоподготовки;

● дешевизну для производителя и потребителя;

● возможность производства тестов в больших объемах;

● простоту чтения и интерпретации результата;

● высокую чувствительность и вопроизводимость;

● возможность количественного определения;

● возможность использования портативных ридеров, совместимых с компьютером;

В связи с большим количеством преимуществ по сравнению с другими скрининговыми методами, ИХА получил широкое применение
и находится на первом месте на мировом рынке диагностики. ИХА применяется в различных областях медицины и народного хозяйства:

● промышленность (контроль качества, безопасности, идентификация продукта, эко-контроль);

● сельское хозяйство, агрономия;

Тест-полоски для ИХА являются чрезвычайно удобными и простыми в использовании, однако они имеют сложное строение и процесс разработки каждого вида ИХА является чрезвычайно трудоемким и высокотехнологичным.

ИХА-тест (иммунохроматографическия полоска) состоит из следующих основных элементов: пластиковой подложки, на которую наклеены все остальные компоненты теста, фильтра (прокладки для образца), прокладки или мембраны с конъюгатом, хроматографической мембраны, содержащей одну или несколько зон захвата иммунных комплексов и контрольную зону захвата, мембраны абсорбции (впитывающая прокладка) (рис. 13). Тест-полоска может быть помещена в пластиковый корпус, в котором имеется приемное и тестовые «окна».

Рис. 13. Схематическое изображение иммунохроматографической тест-полоски

Метод ИХА, так же как и ИФА, имеет несколько форматов. Наиболее распространены 2 схемы: прямой (сэндвичный) и непрямой конкурентный метод.

В схеме прямого (сэндвичного) ИХА используется конъюгат специфических антител с красящей меткой (в случае визуальной оценки результата), нанесенный на мембрану для конъюгата. На тестовой линии иммобилизованы антитела, специфические к данному аналиту, а на контрольной линии – антивидовые антитела, специфические к первичным антителам. При нанесении образца, содержащего анализируемое вещество, на мембране с конъюгатом происходит связывание аналита с конъюгатом Ат-метка. Затем иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где он связывается со специфическими антителами, образуя «сэндвич» Ат-Аг-Ат-метка. избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Таким образом, выявление 2-х линий на тест-полоске является положительным результатом теста. При отсутствии аналита в образце конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске (рис. 14).

Рис. 14. Схема прямого (сэндвичного) ИХА

Метод прямого ИХА используется для выявления высокомолекулярных соединений – вирусов, в т.ч. ВИЧ; различных гормонов (например, в тестах на беременность), возбудителей инфекционных заболеваний.

Схема сэндвичного ИХА не подходит для определения низкомолекулярных веществ, т.к. для образования сэндвича Ат-Аг-Ат антиген должен иметь по крайней мере две антигенные детерминанты (т.е. центра связывания с антителами). Кроме того, из-за стерических затруднений образование такого двойного комплекса с низкомолекулярным антигеном маловероятно. Поэтому для анализа небольших молекул, в том числе наркотических веществ, используется другая схема – непрямой конкурентный ИХА.

Метод конкурентого ИХА основан на конкуренции аналита и иммобилизованного конъгата аналит:белок-носитель за ограниченное количество центров связывания специфических антител, содержащихся в конъюгате Ат-метка. При нанесении образца, содержащего аналит, он связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране с конъюгатом (рис. 15). Далее иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где на иммобилизован конъгат аналит:белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических затруднений: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, антитела имеют один центр связывания с антигеном, который уже является занятым аналитом. Далее иммунный комплекс связывают антивидовые антитела, находящиеся на контрольной линии. В результате, отсутствие окрашенной полосы в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.

При отсутствии анализируемого вещества в образце конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом Аг:белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязавшийся конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа (рис. 15). Формат конкурентного ИХА используется для выявления низкомолекулярных соединений, в том числе метаболитов наркотических соединений в моче, жидкости ротовой полости, экстрактах тканей.

Схема оценки результатов ИХА наркотических веществ представлена на рис. 16. Результат теста является недействительным при отсутствии контрольной линии, т.к. этот факт может свидетельствовать о незавершенной процедуре анализа, либо о том, что иммунохимическая реакция не прошла должным образом по какой-либо причине (из-за испортившихся иммунореагентов или несоблюдения инструкции по применению теста).

Рис. 15. Схема конкурентного ИХА

Рис. 16. Схема оценки результатов ИХА метаболитов наркотических веществ

Часто, особенно в случаях когда недоступны большие количества биообразца для анализа, например, для определения наркотических веществ в слюне, используются тест-полоски в пластиковой кас-
сете (рис. 17).

Рис. 17. Пластиковый корпус иммунохроматографического теста

В качестве меток в ИХА используются различные частицы, обладающие следующими свойствами:

1. Красящие вещества (нано-частицы коллоидного золота или углерода, или частицы окрашенного латекса). В этом случае используется визуальная детекция результата, либо приборное рефлектометрическое определение (например, сканирование). Использование различных красящих меток, присоединенных к частицам латекса, позволяет проводить мильтианализ, в котором линии разного цвета соответствуют различным аналитам. Наиболее часто используемой меткой является нано-частицы коллоидного золота, которые образуют линии темно-бурого (или темно-розового) цвета.

2. Флуоресцентные, фосфоресцентные и биолюминисцентные метки, ковалентно связанные с частицами латекса. Эти метки используются только в приборных вариантах ИХА, когда результат регистрируется специальным ридером. Среди вышеуказанных наиболее распространены флуоресцентные метки.

3. Парамагнитные метки (также закрепленные на частицах латекса). Данный вид меток используется в ИХА с применением приборов, регистрирующих силу магнитного поля.

4. Ферментные метки используются по тому же принципу, что и в ИФА. Ферментативная реакция регистрируется с помощью окрашивания субстратов, и результат анализа является визуальным, или считывается с помощью ридера.

5) Новым направлением в разработке различных разновидностях ИХА является использование липосом в качестве носителей различного рода меток (красящих, флуоресцентных, ферментативных, электроактивных и пр.) [17].

Разработка технологических стадий иммунохроматографического анализа является наукоемким, высокотехнологичным и многостадийным процессом: он включает в себя подбор материалов, реагентов и условий проведения анализа на нескольких этапах разработки ИХА. Перечислим основные этапы разработки:

● выбор материалов для производства тест-полосок;

● подбор оптимальных концентраций иммунореагентов: конъюгатов Ат-метка, конъюгатов антиген-белок-носитель, антивидовых антител;

● подбор дополнительных реагентов для предобработки компонентов тест-полоски (позволяет улучшить свойства потока, и тем самым обеспечить лучшую чувствительность теста);

● подбор реагентов и их концентраций для «забивки» мембраны, если это необходимо (позволяет улучшить характеристики анализа и стабильность теста);

● оптимизация условий проведения анализа реальных образцов;

● изучение стабильности тест-системы, выбор условий хранения и упаковки для увеличения срока хранения тестов.

На рис. 18 представлена схема производства иммунохроматографических тестов. На каждом этапе данной технологической схемы должна быть произведен выбор материалов и реагентов, оптимизация условий проведения технологической стадии.

Все компоненты тест-полоски (фильтр, мембрана с конъюгатом, хроматографическая мембрана, мембрана абсорбции, см. рис. 13) приклеиваются на пластиковую подложку. Подложка – это лист, состоящий из пластика и имеющий клейкое покрытие. При выборе подложки необходимо обращать внимание на качество клея (это может напрямую влиять на характеристики хроматографической мембраны, которая будет приклеена на подложку) и удобство покрывающей пленки (что обеспечивает точность приклеивания компонентов полоски на подложку).

При выборе материала фильтра для образца необходимо руководствоваться теми функциями, которые должен выполнять фильтр:

● впитать достаточное количество образца и доставить его в мембрану для конъюгата;

● довести рН образца до оптимального;

● увеличить или уменьшить вязкость образца для достижения оптимальной скорости прохождения образца по хроматографической мембране;

● увеличить способность образца растворить конъюгат;

● уменьшить забивку мембраны за счет добавления забивки в прокладку для образца.

Рис. 18. Схема стадий производства иммунохроматографических тестов

Фильтры выпускаются из различных пористых материалов: целлюлозы, стекловолокна, тканных сит. Мембраны для конъюгатов производят из стекловолокна, целлюлозы, поверхностно модифицированного полиэфира или искусственных волокон. Подложка для конъюгата должна обладать высокой адсорбционной способностью с одной стороны, и легкостью «смывания» конъюгата из данной зоны, с другой. Т.е. при прохождении жидкости конъюгат должен хорошо десорбироваться из мембраны. При этом при сушке мембраны после нанесения раствора конъюгата не должно происходить изменение конформации антител и разрушения структуры конъюгата.

Хроматографическая мембрана – самый важный элемент иммунохроматографической полоски. Именно на ней проходит иммунохимическая реакция, происходит разделение и связывание иммунореагентов в тестовой и контрольной зонах. Мембрана является самой длинной зоной тест-полоски, именно здесь иммунореагенты проходят максимальный путь в латеральном потоке. При выборе материала для хроматографической мембраны необходимо руководствоваться следующими свойствами, которыми должна обладать мембрана:

1. Гидрофильность – необходима для возможности прохождения потока (а это водная среда) через мембрану. Обеспечивается выбором материала, а также использованием ПАВ.

2. Способность связывать белки: для формирования тестовой и контрольной линии на мембране необходимо закрепить белковые конъюгаты таким образом, чтобы они не смылись латеральным потоком. Белки «прикрепляются» к мембране с помощью электростатического взаимодействия: диполи, содержащиеся в нитроцеллюлозе, связывают диполи белков (рис. 19).

Рис. 19. Диполи нитроцеллюлозы и белков

Для лучшего закрепления белков на мембране после нанесения растворов конъюгатов и антител на мембрану используют «забивку» или блокировку мембраны: ее обрабатывают раствором инертного белка, чтобы занять все вакантные поры, в которые могли бы мигрировать молекулы белковых конъюгатов и антител, находящихся на контрольной и тестовой линиях. Кроме того, в растворах белков необходимо использовать буфер с нужной кислотностью, чтобы обеспечить максимальное электростатическое взаимодействие диполей нитроцеллюлозы и белков.

При производстве мембран для ИХА используются следующие материалы: нитроцеллюлоза (наиболее распространенный материал, используется в 99 % выпускаемых тест-полосок); нейлон; поливинилиденфторид; полиэфирсульфон; стекловолокно.

При выборе материала мембраны необходимо руководствоваться следующими ее физическими параметрами, которые характеризуют свойства латерального потока, проходящего через данную мембрану:

● толщина мембраны, ее объем слоя;

● пористость, размер и распределение пор;

● номинальная скорость потока;

● прочность (предел прочности на разрыв);

● качество поверхности: неровности, порошок и пыль, оставшиеся на поверхности после производства материала.

Все перечисленные характеристики формируют в конечном итоге главный параметр иммунохроматографической мембраны – скорость латерального потока, определяющий все основные параметры ИХА (рис. 20).

Рис. 20. Влияние скорости потока на характеристики анализа

Все вышеописанные подробности приведены для того, чтобы дать представление о сложности процесса разработки и производства на первый взгляд простых тест-полосок. Для того чтобы получить действительно работающий качественный тест, необходимо очень тщательно пройти все стадии разработки и наладки производства. К сожалению, не все нынешние производители это делают на должном уровне, экономя средства для достижения минимальных цен на рынке. В результате мы имеем общепринятое мнение о неточности ИХА тестов. В то же время качественный ИХА тест может иметь характеристики не хуже, чем тест-система для приборного метода ИФА [17].

Современные материалы и возможности тщательного подбора условий при производстве ИХА тестов позволяют разработать даже количественные варианты ИХА. В этом случае детекция результата осуществляется с помощью специальных считывающих устройств – ридеров для ИХА. В зависимости от типа метки, данные устройства осуществляют различные способы детекции: рефрактометрический, флуоресцентный, магнитный (рис. 21).

Рис. 21. Считывающие устройства для детекции результатов ИХА

Рис. 22. Автоматическая платформа для производства ИХА полосок

Количественный формат ИХА характеризуется гораздо большими требованиями к качеству тест-полосок, и, следовательно, к контролю качества каждой стадии производства тестов. Кроме качества материалов и реагентов, на каждой стадии производства необходимо четко, с высокой точностью, контролировать температуру, влажность, концентрацию реагентов, скорость подачи материалов, давления прессов и т.д. Только в этом случае можно получить количественный ИХА тест. Столь высокие требования возможно выполнить только с использованием специальных закрытых, полностью автоматизированных платформ, в которых каждый из параметров контролируется и поддерживается с высокой точностью (рис. 22).

источник

30



Источник: belbriz.ru


Добавить комментарий