Принцип метода определения билирубина общего

Принцип метода определения билирубина общего


Определение общего белка

Принцип данного метода состоит в том, что белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием комплексных соединений, окрашенных в фиолетовый цвет (биуретовый метод). Интенсивность окраски образовавшегося комплекса прямо пропорциональна концентрации общего белка в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 540 (520-560) нм. При калибровке использовали раствор сывороточного человеческого альбумина. Термостат обеспечивает температуру в плюс 37°С.

Нормальные величины общего белка 65-85 г/л [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010].

Определение мочевины

Мочевина — конечный продукт метаболизма белков. Образуется в печени, выводится почками. Используется набор реагентов для определения содержания мочевины в биологических жидкостях уреазным фенол- гипохлоритным методом.

Принцип метода: мочевина под действием уреазы гидролизируется с образованием углекислого газа и аммиака, содержание которого определяется колориметрически по образованию окрашенных продуктов с гипохлоритом и фенолом. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевины в пробе.

Расчет концентрации (С) мочевины в исследуемой пробе проводим по формулам: сыворотка (плазма ) крови (1, 2) :

С = (Е пробы / Е калибратора )Ч30 мг/100 мл, (1)

или С=(Е пробы /Е калибратора)Ч5 ммоль/л, (2)

где Е пробы ? оптическая плотность опытной пробы; Е калибратора ? оптическая плотность калибровочной пробы.

Нормальные значения: сыворотка- 2,5-8,3 ммоль/л; моча — 330-580ммоль/сутки [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010].

Определение креатинина

В качестве унифицированного метода при определении концентрации креатинина в крови и моче предложен метод Поппера, основанный на реакции Яффе.

Принцип метода: в щелочной среде пикриновая кислота взаимодействует с креатинином с образованием оранжево-красной окраски (реакция Яффе ? образование таутомера пикрата креатинина), которую измеряют фотометрически.

Определение в сыворотке крови проводят после депротеинизирования, в моче ? после разведения водой. Определение не совсем специфично, интерферируют вещества с активной метиленовой группой и некоторые восстанавливающие вещества, например глюкоза, ацетон, ацетоуксусная и пировиноградная кислоты.

Нормы содержание креатинина сыворотки крови: у мужчин ? 61-115 мкмоль/л или 0,061-0,115 ммоль/л; у женщин ? 53-97 мкмоль/л или 0,053-0,097 ммоль/л [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010].

Определение аминотрансфераз

Принцип метода: в результате переаминирования, происходящего под действием ACT и АЛТ, образуется щавелевоуксусная и пировиноградная кислоты. При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгиразина, энзиматический процесс останавливается и получается гидразон пировиноградной кислоты, который в щелочной среде дает окрашивание, интенсивность которого пропозициональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты [Глориозова, 2000].

Аланинаминотрансфераза.

Принцип метода: АЛТ катализирует обратимое трансаминирование L- аланина и альфа-кетоглутарата в пируват и L-глутамат. Затем пируват, в присутствии лактатдегидрогеназы восстанавливается до лактата с сопряженным окислением восстановленного (3-никотинамидаденин-динуклеотида (NADH)).

Референтные величины. AJIT у мужчин до 45 Е/л, у женщин до 34 Е/л [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010].

Аспартатаминотрансфераза.

Принцип метода: АСТ катализирует обратимый перенос аминогруппы с L-аспартата на б-кетоглутарат с образованием оксалоацетата и L-глутамата. Затем оксалоацетат в присутствии малатдегидрогеназы восстанавливается до малата с окислением восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (NADH) в 3-никотинамидадениндинуклеотид (NAD).

Скорость окисления НАДН прямо пропорциональна активности АСТ и измеряется фотометрически при длине волны 340 нм [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010].

Референтные величины: ACT у мужчин до 35 Е/л, у женщин до 31 Е/л.

Определение общего билирубина

Определение билирубина в сыворотке крови проводили методом Иендрашика-Грофа. Принцип — в кислой среде в присутствии диазотированного 2,4-дихлоранилина, билирубин образовывает азосоединение красного цвета. Измерение проводят фотометрически при длине волны 546 (540-560) нм. Термостат поддерживает температуру плюс 37°С. Для калибровки используется калибратор соответствующей набору фирмам [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010]. Нормальные величины в сыворотке крови общего билирубина 6,8-20,5 мкмоль/л [Меньшиков, 2008].

Определение электролитов

Определение электролитов выполняется на автоматическом анализаторе «Gem-Premier» [Инструкция к анализатору «Gem-Premier», 2011]. Принцип метода — измерение разности электрических потенциалов между двумя специальными электродами, помещенными в анализируемый раствор (метод ионоселективных электродов).

Ход определения — для определения натрия использовалась стеклянная ионообменная мембрана, а для определения калия — мембраны валиномицина с нейтральными носителями. Обычные натриевые электроды имеют в 1000 раз большую специфичность для натрия, чем для калия. На границе раздела фаз электрод-электролит возникает скачок потенциала, равновесное значение которого при постоянной температуре зависит от природы и активности отдельных ионных компонентов в растворе [Дементьева, 2008].

Концентрация ионов калия в сыворотке крови в норме равна 3,50 — 5,10 ммоль/л. Норма содержания ионов натрия в сыворотке крови равна 135 — 150 ммоль/л.

Определение глюкозы

Метод определения ? ферментативно-фотометрический тест с использованием глюкозооксидазы. Принцип определения: определение глюкозы ферментативным окислением в присутствии глюкозооксидазы. Окрашенный индикатор хинонимин образуется из фенола и 4-аминоантипирина под действием пероксида водорода при каталитическом воздействии пероксидазы [Инструкция к анализатору «RAL-Clima MS-15», 2010].

Нормальные значения от 2,8 до 5,9 ммоль/л.

Статистическая обработка результатов

Для получения точного заключения по материалам исследований, чтобы объективно оценить, количественные данные всех наблюдений проведена математическая обработка данных: методами вариационной статистики — в программном приложении Microsoft Excel среднее арифметическое (), стандартная ошибка среднего арифметического (±m), показатель достоверности различии (Р). Достоверность различий определяем по критерию t Стьюдента с помощью автоматической системы расчета. Различия считались достоверными при 0,05 уровне значимости.



Источник: studbooks.net


Добавить комментарий